HRP和AP是酶，二抗上連接了酶，要有相應(yīng)的底物才能顯色，可以用化學發(fā)光免疫檢測底物 ，顯色方式可以通過發(fā)熒光也可以不發(fā)熒光(例如給予ECL底物，其中的H2O2和魯米諾在HRP的作用下，能在黑暗中發(fā)出熒光;也可以給予雙氧水和DAB，反應(yīng)產(chǎn)生棕色不溶于水的物質(zhì))。根據(jù)酶系來選擇底物，可以分為HRP和AP底物系統(tǒng)。HRP分子量小，穩(wěn)定，便宜，反應(yīng)快速，而AP分子量大，酶促反應(yīng)慢。

　　FITC為異硫氰酸熒光素，本身就是黃綠色熒光，二抗結(jié)合后可直接在熒光顯微鏡下觀察;

　　生物素一般也是掛在二抗上的，利用卵白素分別連接生物素標記的第二抗體和生物標記的酶，由酶催化底物，生成終產(chǎn)物，這個終產(chǎn)物也是不溶于水的。